ISO10993亞慢性經(jīng)口毒性試驗(yàn)報(bào)告由上海飛凡檢測(cè)研究中心權(quán)威提供！上海飛凡檢測(cè)，國(guó)家認(rèn)可一站式檢測(cè)服務(wù)機(jī)構(gòu)，24小時(shí)免費(fèi)服務(wù)熱線：4007726386手機(jī)13764818040（黃工） 1 范圍 本規(guī)范規(guī)定了嚙齒類(lèi)動(dòng)物亞慢性經(jīng)口毒性試驗(yàn)的基本原則、要求和方法。 本規(guī)范適用于檢測(cè)化學(xué)品的亞慢性經(jīng)口毒性。 2 規(guī)范性引用文件 OECD Guidelines for Testing of Chemicals (NO. 408, November 1998) USEPA OPPTES Health Effects Test Guidelines (Series 870.3150 June 1996) 3 試驗(yàn)?zāi)康?確定一定時(shí)期內(nèi)經(jīng)口反復(fù)接觸受試化學(xué)物引起的毒性效應(yīng)，了解受試樣品毒作用的靶器官，取得受試樣品亞慢性經(jīng)口的大無(wú)作用劑量，為確定慢性毒性試驗(yàn)的劑量和初步計(jì)算人群接觸的安全水平提供依據(jù)。 4 定義 4.1 亞慢性經(jīng)口毒性（Subchronic Oral Toxicity）：是指實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在其部分生存期（不超過(guò)10%壽命期）內(nèi)，每日反復(fù)經(jīng)口接觸受試樣品后所引起的健康損害效應(yīng)。 4.2無(wú)可見(jiàn)有害作用水平（No Observed Adverse Effect Level，NOAEL）：在規(guī)定的試驗(yàn)條件下，用現(xiàn)有的技術(shù)手段或檢測(cè)指標(biāo)未觀察到任何與受試樣品有關(guān)的毒性作用的大染毒劑量。 4.3低可見(jiàn)有害作用水平（Lowest Observed Adverse Effect Level，LOAEL）：在規(guī)定的試驗(yàn)條件下，受試樣品引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物形態(tài)、功能、生長(zhǎng)發(fā)育等發(fā)生有害改變的低染毒劑量。 4.4 靶器官(Target Organ)：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)由受試樣品引起的明顯毒性作用的任何器官。 5 試驗(yàn)基本原則 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物每日經(jīng)口攝入不同劑量的受試樣品，連續(xù)染毒3個(gè)月（90d），有時(shí)候可根據(jù)需要染毒6個(gè)月（180d），染毒期間每日觀察動(dòng)物的毒性反應(yīng)。在染毒期間死亡的動(dòng)物要進(jìn)行尸檢。染毒結(jié)束后所有存活的動(dòng)物均要處死、剖驗(yàn)以及作適當(dāng)?shù)牟±斫M織學(xué)檢查。 6 試驗(yàn)方法 6.1 受試樣品 在開(kāi)始本試驗(yàn)之前，應(yīng)盡量搜集受試樣品現(xiàn)有的各種資料。 6.1.1 受試樣品的商品名和其他名稱(chēng)（包括CAS號(hào)）。 6.1.2 受試樣品的結(jié)構(gòu)式、分子式和分子量。 6.1.3 受試樣品的理化性質(zhì)(可包括：外觀、沸點(diǎn)、熔點(diǎn)、折射率、密度、光譜資料、溶解度、揮發(fā)性、化學(xué)活性、光化學(xué)性質(zhì)、電離度、粒度、密度等)。重要的參數(shù)還包括穩(wěn)定性（包括在賦形劑或飼料中）。 6.1.4 受試樣品的分析方法。 6.1.5 受試樣品的生產(chǎn)方法、合成路線和雜質(zhì)。 6.1.6 儲(chǔ)存方法 要有長(zhǎng)期儲(chǔ)存受試樣品（包括在賦形劑或飼料中）的合適方法。否則需定期制備新鮮樣品。 6.1.7 人類(lèi)每日可能接觸的水平 6.1.8 接受樣品的日期應(yīng)登記。開(kāi)始試驗(yàn)前應(yīng)有適當(dāng)數(shù)量的受試樣品。樣品來(lái)源和批號(hào)應(yīng)相同，盡可能使用同一批生產(chǎn)的受試樣品，否則，每一批受試樣品的純度和雜質(zhì)要分別測(cè)定。 6.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼養(yǎng)環(huán)境 6.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 常規(guī)選擇嚙齒類(lèi)動(dòng)物，可以選擇]大鼠。動(dòng)物斷奶后盡早進(jìn)行試驗(yàn)，盡量使動(dòng)物在其體重快速增長(zhǎng)期有更長(zhǎng)的時(shí)間接觸受試樣品。大鼠6周齡好，不可超過(guò)8周齡（體重80～120g，但動(dòng)物體重的變動(dòng)范圍按性別不應(yīng)超出平均體重的20%）。染毒開(kāi)始前至少要有5d時(shí)間使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)清潔級(jí)動(dòng)物房飼養(yǎng)環(huán)境，并在這段時(shí)間內(nèi)觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的狀態(tài)。 6.2.2 環(huán)境設(shè)施 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物試驗(yàn)的環(huán)境設(shè)施應(yīng)符合國(guó)家相應(yīng)規(guī)定。選用常規(guī)飼料，飲水不限制。動(dòng)物可分性別群飼或單籠飼養(yǎng)，群飼時(shí)每籠不超過(guò)5只。 6.2.3 動(dòng)物的性別和數(shù)量 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分組，每組至少20只，雌雄各半。但是考慮到亞慢性試驗(yàn)的重要性，應(yīng)適當(dāng)增加每組雌雄動(dòng)物數(shù)。若計(jì)劃在試驗(yàn)過(guò)程中處死動(dòng)物，需增加計(jì)劃處死的動(dòng)物數(shù)。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)的動(dòng)物數(shù)需達(dá)到能夠有效評(píng)價(jià)受試樣品毒性作用的數(shù)量。 6.3 劑量設(shè)計(jì) 試驗(yàn)一般設(shè)三個(gè)染毒組和一個(gè)對(duì)照組。對(duì)照組動(dòng)物不接觸受試樣品，其它條件均與染毒組相同。高染毒劑量應(yīng)使動(dòng)物產(chǎn)生較明顯的毒性效應(yīng),但不引起過(guò)多動(dòng)物死亡(死亡率不應(yīng)超過(guò)10%)，以免影響結(jié)果評(píng)價(jià)。低劑量組應(yīng)不出現(xiàn)任何毒性作用。若掌握人群接觸水平，則低染毒劑量應(yīng)高于人群的實(shí)際接觸水平。如劑量設(shè)計(jì)得當(dāng)，中劑量組可出現(xiàn)較輕的毒性效應(yīng)，若設(shè)多個(gè)中劑量組時(shí)，應(yīng)產(chǎn)生不同程度的毒性效應(yīng)。此外，可另設(shè)一附加組作追蹤觀察，選用20只動(dòng)物(雌雄各半)，給予高劑量受試樣品，染毒90d，在全程染毒結(jié)束后繼續(xù)觀察一段時(shí)間(一般不少于28d)，以了解毒性作用的持續(xù)性、可逆性或遲發(fā)毒作用；也可在試驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)每組增加一定的動(dòng)物數(shù)，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)每組剖殺部分動(dòng)物（數(shù)量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)分析），部分動(dòng)物繼續(xù)作追蹤觀察。 若為染毒目的加入其它溶劑等賦形劑，這些賦形劑不應(yīng)影響受試樣品的吸收或引起毒性作用，必要時(shí)應(yīng)設(shè)相應(yīng)的賦形劑對(duì)照組。 如果受試樣品的毒性較低，則加入飼料的受試樣品比例較大，應(yīng)注意混入飼料中的受試樣品不應(yīng)超過(guò)5%，否則會(huì)對(duì)動(dòng)物正常營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)生影響。必要時(shí)應(yīng)定期監(jiān)測(cè)飼料或飲水中的受試樣品濃度，觀察其均勻性和穩(wěn)定性。若采用灌胃方式染毒，則每日染毒時(shí)點(diǎn)應(yīng)相同，并定期 (每周)按體重調(diào)整灌胃量，維持染毒劑量不變。其它的染毒方式要加以特殊說(shuō)明。 6.4 染毒方法 常用的方法是將受試樣品混入飼料或飲水中，每周7d染毒。若受試樣品引起飼料和飲水的適口性不良，影響動(dòng)物正常攝入量，或由于某種原因，受試樣品不能加入飼料和飲水中，可采用灌胃法或藥囊法，此時(shí)每周可染毒5～7d。試驗(yàn)期間各組動(dòng)物染毒的方式應(yīng)完全相同。 6.5 限量試驗(yàn) 在試驗(yàn)中，如果劑量預(yù)期達(dá)每天1000 mg/kg或以上時(shí)仍未產(chǎn)生可觀測(cè)到的毒性效應(yīng)（但人類(lèi)接觸水平的資料表明需用高劑量進(jìn)行試驗(yàn)），而且根據(jù)相關(guān)結(jié)構(gòu)化合物可以預(yù)測(cè)受試樣品毒性時(shí)，可不必設(shè)三個(gè)劑量水平進(jìn)行試驗(yàn)。 6.6 臨床觀察 試驗(yàn)期內(nèi)每天至少觀察一次，必要時(shí)增加觀察次數(shù)。對(duì)附加組還要增加至少28d。 觀察期間對(duì)動(dòng)物的任何毒性表現(xiàn)均應(yīng)記錄，記錄內(nèi)容包括發(fā)生時(shí)間、程度和持續(xù)時(shí)間。觀察應(yīng)至少包括如下內(nèi)容：皮膚和被毛、眼和粘膜、呼吸、循環(huán)、植物神經(jīng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肢體運(yùn)動(dòng)和行為活動(dòng)等改變。對(duì)死亡動(dòng)物應(yīng)進(jìn)行解剖，對(duì)質(zhì)弱或?yàn)l死動(dòng)物應(yīng)隔離或處死和解剖。記錄每周飼料消耗量，經(jīng)飲水染毒時(shí)還應(yīng)記錄每天飲水消耗量，記錄每周體重變化。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死動(dòng)物作相關(guān)檢查。 6.7 臨床檢查 6.7.1 眼科檢查 建議在動(dòng)物染毒前和染毒后，好對(duì)所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，至少應(yīng)對(duì)高劑量組和對(duì)照組動(dòng)物，使用眼科鏡或其它有關(guān)設(shè)備進(jìn)行眼科檢查。若發(fā)現(xiàn)動(dòng)物有眼科變化則應(yīng)對(duì)所有動(dòng)物進(jìn)行檢查。 6.7.2 血常規(guī)檢查和其它血液指標(biāo)檢查 至少應(yīng)在染毒結(jié)束時(shí)進(jìn)行，必要時(shí)應(yīng)在染毒中期也進(jìn)行檢查。如設(shè)立附加組，染毒結(jié)束時(shí)如有異常的指標(biāo)，附加組追蹤觀察結(jié)束時(shí)應(yīng)進(jìn)行檢查。測(cè)定指標(biāo)至少應(yīng)包括血球壓積、血紅蛋白濃度、紅細(xì)胞數(shù)、血小板數(shù)、白細(xì)胞總數(shù)和分類(lèi)，必要時(shí)測(cè)定網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)、凝血功能等指標(biāo)。 6.7.3 血液生化檢查 至少應(yīng)在染毒結(jié)束時(shí)進(jìn)行，必要時(shí)應(yīng)在染毒中期也進(jìn)行檢查。染毒結(jié)束時(shí)如有異常的指標(biāo)，附加組追蹤觀察結(jié)束時(shí)應(yīng)進(jìn)行檢查。檢查指標(biāo)包括肝功能、腎功能、電解質(zhì)平衡、碳水化合物代謝等。測(cè)定指標(biāo)至少應(yīng)包括丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、乳酸脫氫酶（LDH）、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、總膽紅素（TBIL）、白蛋白（ALB）、總蛋白(TP)等，還應(yīng)根據(jù)受試樣品可能的毒作用表現(xiàn)補(bǔ)充如下指標(biāo)：如鳥(niǎo)氨酸脫羧酶、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、總膽固醇、甘油三酯、正鐵血紅蛋白、膽堿酯酶、鈣、磷、氯、鈉、鉀、血糖等。此外，還可根據(jù)所觀察到的毒性作用進(jìn)行其它更大范圍的臨床生化檢查，以便進(jìn)行全面的毒性評(píng)價(jià)。 6.7.4 尿液檢查 一般不需要進(jìn)行，只有當(dāng)懷疑存在或觀察到相關(guān)毒性作用時(shí)才進(jìn)行尿液檢查。 6.8 病理檢查 6.8.1 大體解剖 所有動(dòng)物均應(yīng)進(jìn)行全面的大體解剖，內(nèi)容包括動(dòng)物的外觀、體腔開(kāi)口處、胸腔、腹腔等。肝、腎、腎上腺和睪丸等器官應(yīng)在分離后盡快稱(chēng)重以防水分丟失。應(yīng)將主要組織器官保存在固定液中，以備日后進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。 6.8.2 臟器稱(chēng)重 心、肝、脾、肺、腎、腦、睪丸的重量和相對(duì)重量（臟器系數(shù)=臟器重量/體重×100%）為必測(cè)指標(biāo)，必要時(shí)加測(cè)其它臟器重量和臟器系數(shù)。 6.8.3 病理組織學(xué)檢查 通常至少應(yīng)包括心、肝、脾、腎、胃、大腦、肺、睪丸（卵巢）、附睪、腎上腺等。根據(jù)需要，還可包括腦橋、小腦和大腦皮層、腦垂體、主動(dòng)脈、氣管、胰、十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸、直腸、膀胱、甲狀腺（包括甲狀旁腺）、胸腺、前列腺、子宮、乳腺、皮膚、肌肉、胸骨(包括骨髓)、淋巴結(jié)、眼球等。 如果毒性作用提示或作為被研究的靶器官時(shí)還可選擇檢查唾液腺、生殖附屬器官、皮膚、眼、股骨(包括關(guān)節(jié)面)、脊髓(包括頸部、胸部、腰部)、淚腺、雌性乳腺、大腿肌肉等。 要先對(duì)高劑量組和對(duì)照組動(dòng)物及系統(tǒng)解剖時(shí)發(fā)現(xiàn)的異常組織作詳盡的組織學(xué)檢查，其他劑量組一般僅在高劑量組有異常發(fā)現(xiàn)時(shí)才進(jìn)行組織學(xué)檢查。在附加組，應(yīng)對(duì)那些在染毒組呈現(xiàn)毒性作用的組織和器官進(jìn)行檢查。 中、低劑量組動(dòng)物也需做肺的病理組織學(xué)檢查，肺部感染情況可判斷動(dòng)物的健康狀況。必要時(shí)肝、腎也做同樣的檢查。 6.9 結(jié)果統(tǒng)計(jì)與評(píng)價(jià) 6.9.1 結(jié)果的處理 可通過(guò)表格形式總結(jié)試驗(yàn)結(jié)果，顯示試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)各組動(dòng)物數(shù)、出現(xiàn)毒性反應(yīng)的動(dòng)物數(shù)、毒性反應(yīng)的類(lèi)型和動(dòng)物出現(xiàn)毒性反應(yīng)的百分比。對(duì)所有數(shù)據(jù)應(yīng)采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。 6.9.2 試驗(yàn)結(jié)果的評(píng)價(jià) 亞慢性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)結(jié)合前期試驗(yàn)結(jié)果，并考慮到毒性效應(yīng)指標(biāo)和解剖及病理組織學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。毒性評(píng)價(jià)應(yīng)包括受試樣品染毒劑量是否出現(xiàn)毒性反應(yīng)、毒性反應(yīng)的發(fā)生率及其程度之間的關(guān)系。這些反應(yīng)包括行為或臨床異常、肉眼可見(jiàn)的損傷、靶器官、體重變化情況、死亡效應(yīng)以及其它一般或特殊的毒性作用。成功的亞慢性試驗(yàn)應(yīng)能夠提出統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義的無(wú)可見(jiàn)有害作用水平（NOAEL）。 7 鑒定報(bào)告 除一般鑒定報(bào)告的內(nèi)容外，還應(yīng)包括以下方面： 7.1 試驗(yàn)方法； 7.2 按性別和劑量的毒性反應(yīng)數(shù)據(jù)； 7.3 試驗(yàn)期內(nèi)動(dòng)物死亡的數(shù)量和時(shí)間； 7.4 毒性作用或其它作用； 7.5 每種異常癥狀出現(xiàn)的時(shí)間及其轉(zhuǎn)歸情況； 7.6 動(dòng)物體重資料、食物攝入量和/或飲水量資料； 7.7 眼科檢查結(jié)果 7.8 血液學(xué)檢查結(jié)果； 7.9 臨床生化檢查結(jié)果； 7.10 大體解剖所見(jiàn)； 7.11 病理組織學(xué)檢查所見(jiàn)的詳細(xì)描述； 7.12 對(duì)結(jié)果進(jìn)行處理的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法； 7.13 確定無(wú)可見(jiàn)有害作用水平（NOAEL）； 7.14 結(jié)論。 8 試驗(yàn)結(jié)果的解釋 亞慢性經(jīng)口毒性試驗(yàn)?zāi)軌蛱峁┦茉嚇悠吩诮?jīng)口反復(fù)接觸時(shí)的毒性作用資料。雖然其試驗(yàn)結(jié)果僅能有限地外推到人，但它可為確定人群暴露的無(wú)作用水平和允許暴露水平提供有價(jià)值的信息。 涉及地區(qū)：廣東省、浙江省、福建省、海南省、云南省、廣西省、貴州省、新疆省、四川省、重慶市、西藏省、湖南省、江西省、湖北省、上海市、北京市、天津市、安徽省、江蘇省、甘肅省、寧夏省、內(nèi)蒙古省、黑龍江省、吉林省、遼寧省、山東省、陜西省、山西省、河南省、河北省