檢測認證人脈交流通訊錄
110028人表皮細胞生長因子(VEGF)定量檢測試劑盒(ELISA)
- 用 途:
- 僅供科研使用,定量檢測血清、血漿、細胞培養上清液中人表皮細胞生長因子(VEGF)的濃度。
- 僅供科研使用,不得用于臨床檢驗。
人表皮細胞生長因子(VEGF)定量檢測試劑盒(ELISA)說明書
【產品名稱】
通用名稱:人表皮細胞生長因子(VEGF)定量檢測試劑盒(ELISA)
英文名稱:Human Vascular endothelial growth factor(VEGF) ELISA KIT
【包裝規格】
48人份/盒,96人份/盒
【預期用途】
僅供科研使用,定量檢測血清、血漿、細胞培養上清液中人表皮細胞生長因子(VEGF)的濃度。
【檢驗原理】
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。在預包被抗人表皮細胞生長因子(VEGF)抗體(固相抗體)的微孔酶標板中,加入人表皮細胞生長因子(VEGF)校準品和待測樣本,再加入另一株HRP標記的抗人表皮細胞生長因子(VEGF)抗體(酶標抗體),經過溫育與充分洗滌,去除未結合的組分,在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原-酶標抗體的夾心復合物。加底物A和B,底物在HRP催化下,產生藍色產物,在終止液(2M 硫酸)作用下,最終轉化為黃色,在酶標儀上測定吸光度(OD值),吸光度(OD值)與待測樣品中人表皮細胞生長因子(VEGF)的濃度正相關。擬合校準品曲線,可以計算出樣本中人表皮細胞生長因子(VEGF)的濃度。
【主要組成成分】
主要成分
組分 數量 主要成分
校準品 0.5ml/管*6管 抗原配制的6個濃度標準品
包被微孔板 96T 預包被固相抗體
HRP標記抗體 6mL HRP標記的檢測抗體
底物液A 6mL 過氧化脲工作液
底物液B 6mL TMB工作液
20×濃縮洗滌液 30mL 含0.15%Tween20的PBS
說明書 1份 --
自封袋 1個 --
不干膠 2片 --
校準品濃度依次為:1000、500、250、125、62.5、0 pg/ml。校準品已經通過測試,結果表明HBs抗原陰性,HIV1、HIV2和HCV抗體陰性,由于不存在一種試驗方法能夠完全保證沒有這些物質,本品必須按照具有潛在的感染性進行處理,處理過程應當遵循通用的安全措施。
需要但未提供的材料及耗材
1、酶標儀
2、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水
4、洗瓶或者自動洗板機
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、500ml量筒
7、無粉一次性乳膠手套
8、質控品(可從藍圖生物科技產品研發系統中選擇)
【儲存條件及有效期】
1、2-8℃保存,切勿冷凍,有效期6個月。
2、開封使用后,包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中,密閉自封袋,并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
3、開封后,按照建議的條件保存,校準品、包被微孔板和HRP標記抗體,有效期為14天,其他成分在標簽標明的有效期內是穩定的。
【適用儀器】
半自動的酶標儀,如Thermo MK3,或者國產酶標儀。
【樣本要求】
樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中,不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
1、細胞培養上清:4000rpm條件下離心20min,去除細胞顆粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反復凍融。
2、血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,4000rpm條件下離心20min,小心地分離出血清,保存在- 20℃以下,避免反復凍融。
3、血漿:肝素,EDTA,或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下,離心20分鐘取上清,血漿保存在-20℃以下,避免反復凍融。
樣本保存和穩定性
樣本在2-8℃條件下,可以儲存72h,或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后,不是一次檢測完,請按一次用量分裝凍存,避免反復凍融,使用時在室溫下解凍,確保樣品均勻充分解凍。
【檢驗方法】
試劑準備
1、使用前,所有的組分都要至少復溫30min,確保充分復溫到室溫。
2、濃縮洗滌液:從冰箱取出的濃縮洗滌液,會有結晶產生,這屬于正常現象,水浴加熱使結晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水,按1:20稀釋,即1份的濃縮洗滌液,添加19份的蒸餾水。
3、底物:底物液A和B,在使用前,按1:1體積充分混合,混合后15分鐘內使用。
操作程序
1、所有試劑和組分都先恢復到室溫,標準品、質控品和樣品,建議做復孔。
2、按前面試劑準備中描述的方法,配制好試劑盒各種組分的工作液。
3、從鋁箔袋中取出所需板條,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
4、設置標準品孔、樣本孔和空白孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,樣本孔加待測樣本50μL,空白孔不加。
5、除空白孔外,標準品孔和樣本孔,加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體100μL。
6、用封板膜蓋住反應板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
7、揭開封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置20s,甩去洗滌液,吸水紙上拍干。
8、如此重復4次(共洗板5次)。若使用自動洗板機,請按洗板機操作程序進行洗板,添加浸泡20s的程序,可以提高檢測的精度。洗板結束,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上,充分拍干反應板。
9、將底物A和B按1:1體積充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。
10、所有孔加入終止液50μL,在酶標儀上讀取各孔吸光度(OD值)。
【檢驗結果的解釋】
檢測完成后,以標準品濃度做為縱坐標,對應的吸光度(OD值)作為橫坐標,利用計算機軟件,采用四參數Logistic曲線擬合(4-pl),創建標準曲線方程,通過樣本的吸光度(OD值),利用方程計算樣品的濃度值。
如果樣品被稀釋,通過上述方法測的的濃度值,要乘以稀釋倍數,才是樣品的最終濃度。
【檢驗方法的局限性】
1、僅供科研使用,不得用于臨床診斷。
2、在試劑盒標示的有效期內使用,過期產品不得使用。
3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。
4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。
5、如果樣本值高于最高標準品濃度值,請將樣本適當稀釋后,再重新測定。
6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結果,檢測前,請排除該因素。
7、通過其他方法得到的檢測結果,與本試劑盒測定結果不具有直接的可比性。
【產品性能指標】
1、物理性能
試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝,無破損漏氣。
2、劑量反應曲線線性
校準品劑量反應曲線相關系數r值,大于等于0.9900。
3、精密度
批內精密度:三組已知的高、中、低濃度樣品,進行二十次在同一個板塊內精度評估。批內變異系數CV%小于10%。
批間精密度:三組已知的高、中、低濃度樣品,進行二十次在不同板塊內精度評估。批間變異系數CV%小于15%。
4、靈敏度
最低檢出劑量小于5 pg/ml。
5、回收率
三組已知的高、中、低濃度樣品,進行五次回收率評估,回收率在85%-115%之間。
6、特異性
本試劑盒識別天然和重組人表皮細胞生長因子(VEGF),與結構類似物無交叉。
7、穩定性
2℃-8℃保存,有效期6個月。
售后電話:13559590085
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