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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理與操作步驟

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　　ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理：　　本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人26S蛋白酶體（26S PSM）水平。用純化的人26S蛋白酶體（26S PSM）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入26S蛋白酶體（26S PSM），再與HRP標(biāo)記的26S蛋白酶體（26S PSM）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的26S蛋白酶體（26S PSM）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中人26S蛋白酶體（26S PSM）活性濃度。　　操作步驟：　　1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。　　2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。　　3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。　　4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。　　5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。　　6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。　　7.溫育：操作同3。　　8.洗滌：操作同5。　　9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。　　10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。　　11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。　　https://www.chem17.com/st523160/product_36937929.html 　　http://www.ylkbio.com/Products-36937929.html

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