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活細菌/死細菌雙染試劑盒

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　　活細菌/死細菌雙染試劑盒　　SYTO 9活細菌/死細菌雙染試劑盒的工作原理在于：SYTO 9和PI的光譜特征以及穿透健康細菌細胞的能力不同。單獨使用時，SYTO 9能對群體內的所有細菌進行標記—具有完整膜和受損膜的細菌；相反，PI只能滲透進入受損的膜，PI的插入會引起SYTO 9染色熒光的降低，當體系內加入兩種染料時。因此，通過適量比例的SYTO 9和PI的混合染色，具有完整膜結構的細菌呈綠色熒光，而具受損膜結構的細菌呈紅色熒光。兩者染料的最大激發和發射波長分別是480/500nm（SYTO 9）和 490/635nm（PI）。背景基本無熒光。本試劑盒兼容于熒光顯微鏡，熒光光度計、熒光酶標儀、流式細胞儀或其它熒光檢測儀器。　　染色條件的優化：　　試劑盒內的兩種染料都經過平衡優化，按照1：1的比例進行混合用于絕大多數的樣本都能得到良好的區分活/死細菌。偶然情況下，兩種染料的混合比例需根據實際需求進行優化調整。比如：在待檢樣本中，綠色熒光太突出，建議要么降低SYTO 9濃度，要么提高PI濃度。　　為了全面優化染色條件，建議測試梯度濃度的SYTO 9，每一種濃度與梯度濃度的PI進行組合染色。建議按照1ml細菌懸液加入3?l不同混合比率的染料預混液。　　[注]：SYTO 9 +PI 對細菌的染色請按照說明書建議的15min來操作，不要超過30min。 SYTO 9有很好的細菌滲透性，我們給的實驗條件都是優化過。 SYTO 9只有在哺乳動物細胞染色，可能會延長染色時間到120min。　　由于染的是活菌+死菌的比例，請染色后盡快觀察，不要超過1h。另，染色后基本是不用清洗的，除非覺得背景熒光很高，就是非細菌的菌體部分都能看到熒光，才有必要簡單清洗一次。　　三、熒光顯微鏡操作步驟：　　活菌和死菌的熒光可能用標準的熒光素長通濾片設置來同時觀察。替代方案的話，活菌（綠色熒光）和死菌（紅色熒光）可分別用熒光素和Texas Red帶通濾光片設置。用于本試劑盒檢測的建議熒光顯微鏡濾片設置。　　http://www.shujibio.com/Products-38641004.html 　　https://www.chem17.com/st326659/erlist_2527117.html

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