Roche LightCycler480 II熒光定量PCR儀是一款廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析、突變檢測、病原檢測等領(lǐng)域的設(shè)備。其主要結(jié)構(gòu)和工作原理如下：
主要結(jié)構(gòu)
1.光學(xué)系統(tǒng)：LightCycler480 II配備了高靈敏度的熒光檢測系統(tǒng)，包含多個激光光源和光電倍增管（PMT）。系統(tǒng)通過激光激發(fā)不同波長的熒光染料，結(jié)合濾光片選擇特定的波長范圍，從而檢測PCR反應(yīng)中的熒光信號。
2.熱循環(huán)模塊：儀器內(nèi)部具有精確的熱循環(huán)模塊，負(fù)責(zé)控制溫度的變化。該模塊能夠快速地升降溫度，確保每個PCR周期中的變性、退火和延伸步驟的高效完成。通常，LightCycler480 II使用的是Peltier熱電器件，以實(shí)現(xiàn)快速且均勻的溫控。
3.樣本管與多孔板：PCR反應(yīng)液被裝載在96孔或384孔的PCR板中。LightCycler480 II具有高通量的樣本處理能力，可以同時(shí)處理大量樣本，減少分析時(shí)間。
4.計(jì)算機(jī)與軟件系統(tǒng)：儀器配備有強(qiáng)大的數(shù)據(jù)采集與分析軟件，如LightCycler 480軟件。它不僅負(fù)責(zé)監(jiān)控實(shí)時(shí)PCR過程中的熒光數(shù)據(jù)，還能夠進(jìn)行數(shù)據(jù)分析、結(jié)果報(bào)告生成及實(shí)驗(yàn)設(shè)定等。
工作原理
1.熒光定量PCR：Roche LightCycler480 II的工作原理基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)。與傳統(tǒng)的PCR相比，實(shí)時(shí)熒光PCR在每個擴(kuò)增周期中實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號的變化。其通過熒光染料（如SYBR Green或TaqMan探針）結(jié)合到PCR產(chǎn)物中，隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，產(chǎn)物逐漸增加，熒光信號也隨之增強(qiáng)。
2.熒光信號檢測：當(dāng)熒光染料與PCR產(chǎn)物結(jié)合時(shí)，激光光源會激發(fā)熒光分子發(fā)射熒光，經(jīng)過濾光片后，由光電倍增管（PMT）捕捉到熒光信號。這些信號被轉(zhuǎn)化為數(shù)字?jǐn)?shù)據(jù)，表示各個時(shí)間點(diǎn)上PCR產(chǎn)物的數(shù)量。
3.數(shù)據(jù)分析：熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的擴(kuò)增成正比。在反應(yīng)的早期階段，熒光信號較弱，隨著擴(kuò)增產(chǎn)物的積累，熒光信號會達(dá)到一個閾值（CT值）。通過監(jiān)測該閾值的到達(dá)時(shí)間，儀器可以計(jì)算出初始模板的數(shù)量。
4.定量分析：通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比，LightCycler480 II可以準(zhǔn)確計(jì)算出樣本中靶基因的相對或絕對數(shù)量。因此，這種儀器廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)定量、病原檢測及突變分析等領(lǐng)域。
總的來說，Roche LightCycler480 II熒光定量PCR儀通過其精確的溫控系統(tǒng)、高效的熒光信號檢測系統(tǒng)和強(qiáng)大的數(shù)據(jù)分析功能，使得實(shí)時(shí)PCR技術(shù)得到了廣泛的應(yīng)用，尤其在基因組學(xué)研究和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中具有重要的作用。
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