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小鼠誘導型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA試劑盒

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品　　牌：
DM

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出廠價：
6

主要規格：
96T/48T

用　　途：
實驗

上海篤瑪生物科技有限公司長期長期供應原裝ELISA試劑盒，公司與國內知名酶聯免疫分析試劑盒（ELISA試劑盒）廠家成為戰略合作伙伴。各種屬ELISA試劑盒產品種類齊全，質量可靠。篤瑪供應產品名稱：小鼠誘導型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA試劑盒庫存狀態：現貨供應使用范圍：僅供科研使用，不得用于臨床。產品用途：用于測定人清、血漿、組織及相關液體樣本中的含量或活性。檢測種屬：大小鼠、人、豚鼠、兔子、豬、犬、牛羊、雞鴨ELISA試劑盒等種屬保存：2~8℃、有效期6個月詢價：您可以通過電話、郵件、傳真或在線客戶方式詢價產品特點：是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法，由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢。篤瑪生物試劑盒組成及試劑配制小鼠誘導型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA試劑盒 1. 酶聯板：一塊(96孔) 2. 標準品(凍干品)：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為20 ng/ml，做系列倍比稀釋(注：不要直接在板中進行倍比稀釋)后，分別稀釋成20 ng/ml，10 ng/ml，5 ng/ml，2.5 ng/ml，1.25 ng/ml，0.625 ng/ml，0.312 ng/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 ng/ml，臨用前15分鐘內配制。如配制10 ng/ml標準品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 20 ng/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。 3. 樣品稀釋液：1×20ml。 4. 檢測稀釋液A：1×10ml。 5. 檢測稀釋液B：1×10ml。 6. 檢測溶液A：1×120μl(1:100)臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋，稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(100μl/孔)，實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl檢測溶液A加990μl檢測稀釋液A的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制。 7. 檢測溶液B：1×120μl/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。 8. 底物溶液：1×10ml/瓶。 9. 濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 10. 終止液：1×10ml/瓶(2N H2SO4)。 11. 覆膜：5張 12. 使用說明書：1份自備物品小鼠誘導型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA試劑盒 1. 酶標儀(建議參考儀器使用說明提前預熱) 2. 微量加液器及吸頭，EP管 3. 蒸餾水或去離子水，全新濾紙篤瑪生物ELISA試劑盒實驗原理用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗PI3K抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗PI3K抗體、HRP標記的親和素，經過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的PI3K呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。標本的采集及保存 1. 組織勻漿：將動物的組織標本先用PBS洗滌，去除多余血液，勻漿化后放在20ml PBS中于-20℃放置過夜，第二天，經過二次反復凍融破膜，將勻漿物5000x g離心5分鐘，取上清即可檢測。 2. 其它生物標本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。注：以上標本置4℃保存應小于1周，-20℃或-80℃均應密封保存，-20℃不應超過1個月，-80℃不應超過2個月；標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。具體操作步驟說明如下實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解)；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。 1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。 2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內配制)，酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。 3. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。 4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。 5. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。 6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止)。 7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。 8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進行檢測。注： 1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。 2. 加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，第一個孔與最后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預孵育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)最好控制在10分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。 3. 孵育：為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。 4. 洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響最后的酶標儀讀數。 5. 試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請精確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。 6. 反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。 7. 底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請最后乘以稀釋倍數。洗板方法 1. 手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘，根據需要，重復此過程數次。 2. 自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。特異性本試劑盒可同時檢測重組或天然的人PI3K，且與其它相關蛋白無交叉反應。計算小鼠誘導型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA試劑盒以標準物的濃度為縱坐標(對數坐標)，OD值為橫坐標(對數坐標)，在對數坐標紙上繪出標準曲線。推薦使用專業制作曲線軟件進行分析，如curve expert 1.3，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度，再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

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楊燕燕

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