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上海篤瑪生物科技有限公司

檢測認證人脈交流通訊錄

兔C-反應蛋白(CRP) ELISA 試劑盒

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  • 品  牌:
  • DM
  • 主要規格:
  • 96T/48T
  • 用  途:
  • 實驗
    • 操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。 1. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。 為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。 2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。 3. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。 5. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。 6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。 8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。 注: 1. 用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數分鐘,以便試劑集中到管底。 2. 每次實驗留一孔作為空白調零孔,該孔不加任何試劑,只是最后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3. 為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜。 4. 未使用完的酶標板或者試劑,請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標記親和素工作液。 5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。 洗板方法 手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。 自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 注意事項 1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。 2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。 3. 一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。 5. 如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請最后乘以稀釋倍數。 6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。 7. 底物請避光保存。 8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 計算 以標準物的濃度為橫坐標(對數坐標), OD值為縱坐標(普通坐標), 在半對數坐標紙上繪出標準曲線, 根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度; 再乘以稀釋倍數; 或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式, 將樣品的OD值代入方程式, 計算出樣品濃度, 再乘以稀釋倍數, 即為樣品的實際濃度。

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