檢測認證人脈交流通訊錄
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上海篤瑪生物科技有限公司是一家國內合資集科研和生產為一體的專業化生物公司。專業提供各類進口品牌,研發生產ELISA試劑盒、細胞株、抗體、耗材、培養基等產品,并提供實驗外包,技術指導,操作指導,代做實驗,代做課題等技術服務。公司擁有世界一流水平的研發團隊、領先的技術、尖端的研發平臺及現代化的生產基地,生產各類科研用的產品。 我們由衷的感謝海內外科學家、感謝國內外廣大科研工作者、學者予以我們鼎力的支持和理解,我們將在未來的工作中,百尺竿頭,發揮優勢,勇于開拓、自主創新、敢為人先、鍥而不舍,在生命科學的道路上,不斷進取,奮發努力,瞄準國際生命科學的前沿,不斷創新研發新產品。為科研工作提供更好、更人性化的服務。
上海篤瑪生物技術有限公司擁有六大服務平臺:生物樣品分析平臺、微陣列芯片平臺、新一代測序平臺、生物標志物平臺、分子檢測平臺、生物信息平臺,憑借高標準的技術平臺和多樣化的服務等競爭優勢,公司向國內外企業和相關單位提供系統的生物學研究全面解決方案。目前正在為多達18家跨國制藥企業(包括排名前10位的跨國制藥企業)和超過3000家的國內科研機構、醫院等提供基因表達譜、基因分型、比較基因組學、DNA甲基化miRNA、生物標志物篩選及確認、生物信息等技術服務。
篤瑪生物成立的初衷就定位于以人為本,以品質取勝的理念,為我們國家生命科學研究做一些力所能及的工作。公司主要經營的產品有測試盒、標準品、有機試劑以及常用的進口試劑品牌的代理,質量保證。
多年來我們一直堅守著這個承諾,在工作中自始至終貫穿著為科研服務-這個一貫的宗旨。我們由衷的感謝海內外科學家、感謝國內外廣大科研工作者、學者予以我們鼎力的支持和理解,我們將在未來的工作中,
百尺竿頭,發揮優勢,勇于開拓、自主創新、敢為人先、鍥而不舍,在生命科學的道路上,不斷進取,奮發努力,瞄準國際生命科學的前沿,不斷創新研發新產品。為科研工作提供更好、更人性化的服務。
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標本的采集及保存
1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3.細胞培養物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
注:標本溶血會影響最后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
標本的稀釋原則:
首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內,檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。最后計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應再乘以“N”。
標準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內配制。
如配制150 pg/ml標準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
生物素標記抗體的稀釋原則:
臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。
辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則:
臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。
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操作步驟
實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。
為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。
3.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。
5.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。
溫馨提示:不可用于臨床治療。
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