檢測認證人脈交流通訊錄
- 羊抗人C4血清
標本要求
1. 血清：
室溫血液自然凝固10-20 分鐘后，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
2. 血漿：
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20 分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成應再次離心。
3.尿液：
用無菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4.細胞培養上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。
5.培養細胞:
檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100 萬/ml 左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
6.組織標本:
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻
漿器將標本勻漿化。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
7.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
8.不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
羊抗人C4血清
操作步驟
試管法（改良 Mayer 法）
1、致敏羊紅細胞： 2%綿羊紅細胞加等量稀釋后的溶血素（ 1:2000），混勻，置 37℃水浴 30min。
2、稀釋血清：待測血清 0.2ml，加應用液 3.8ml，稀釋度為 1:20。
3、配制溶血標準管：全溶血管:2%綿羊紅細胞 2ml 加 8ml 蒸餾水，混勻。
50%溶血管:取全溶血管液 2ml 加緩沖液 2ml。
4、按表所示，依次加各成分于試管中，混勻，置 37℃水浴 30min， 第 10 管為非溶血對照：補體 CH50 測定試管法
5、結果測定：取出試管， 2000r/min 離心 10min，對照管應不溶血。肉眼比色，選與 50%溶血標準管相近二管，再用分光光度計測（波長 542nm、 0.5cm 比色杯） OD 值，
確定與標準管最接近者為終點管，然后按下公式計算 CH50 值：
血清補體 CH50（ U/ml） =（ 1/血清用量）×稀釋度。
如第 5 管為終點管，測待測血清中CH50為66.7U/ml。血清補體CH50正常值為50-100U/ml。
羊抗人C4血清
試劑及配制
1、緩沖生理鹽水：
（ 1） 貯存液： Na2HPO4.12H2O 2.85g
KH2PO4 0.27g
NaCl 17.00g
蒸餾水定容至 100ml
4℃保存備用
（ 2）應用液： 5ml 貯存液加 95ml 蒸餾水，再加 10%硫酸鎂 0.1ml， 當日配制， 12 小時內使用。
2、2%綿羊紅細胞：無菌采取綿羊血液，于等量 Alsever 液中可保存 3 周。用前以緩沖液洗 3次，并配成 2%細胞懸液。必要時可用吸光光度法或細胞計數法使懸液細胞濃度標準化。
3、溶血素：將綿羊紅細胞溶血素（效價 1:4000），用應用液做 1:2000 倍稀釋（即 1ml 溶血素加 1999ml 應用液）。
4、待測血清：新鮮血液室溫放置 30min，再 4℃放置 60min，使血塊收縮， 4℃離心（ 3000r/min）10min，取上清，-20℃保存。
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