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篤瑪石榴皮鞣素說明書

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品　　牌：
DM

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出廠價：
1 元/瓶

主要規(guī)格：
10mg

用　　途：
科研

石榴皮鞣素操作步驟試管法（改良 Mayer 法） 1、致敏羊紅細(xì)胞： 2%綿羊紅細(xì)胞加等量稀釋后的溶血素（ 1:2000），混勻，置 37℃水浴 30min。 2、稀釋血清：待測血清 0.2ml，加應(yīng)用液 3.8ml，稀釋度為 1:20。 3、配制溶血標(biāo)準(zhǔn)管：全溶血管:2%綿羊紅細(xì)胞 2ml 加 8ml 蒸餾水，混勻。 50%溶血管:取全溶血管液 2ml 加緩沖液 2ml。 4、按表所示，依次加各成分于試管中，混勻，置 37℃水浴 30min，第 10 管為非溶血對照：補體 CH50 測定試管法 5、結(jié)果測定：取出試管， 2000r/min 離心 10min，對照管應(yīng)不溶血。肉眼比色，選與 50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管相近二管，再用分光光度計測（波長 542nm、 0.5cm 比色杯） OD 值，確定與標(biāo)準(zhǔn)管最接近者為終點管，然后按下公式計算 CH50 值：血清補體 CH50（ U/ml） =（ 1/血清用量）×稀釋度。如第 5 管為終點管，測待測血清中CH50為66.7U/ml。血清補體CH50正常值為50-100U/ml。石榴皮鞣素標(biāo)本要求 1. 血清：室溫血液自然凝固10-20 分鐘后，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。 2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20 分鐘后，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成應(yīng)再次離心。 3.尿液：用無菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。 4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。 5.培養(yǎng)細(xì)胞: 檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。 6.組織標(biāo)本: 切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。 7.標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融 8.不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。石榴皮鞣素試驗操作中可能影響結(jié)果的原因及其相應(yīng)的解決辦法 1 選擇試劑選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡至少30分鐘。 2 加樣可能原因： 1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣； 2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。解決辦法： 1）標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2) 加樣后及時放入孵箱。 3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。 4) 如果采用AT或其他全自動加樣，最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標(biāo)本較多時，請分批操作。 3 孵育可能原因： 1) 孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底； 2) 孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗徹底。解決辦法： 1) 貼封片或加蓋； 2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。 4 洗板可能原因： 1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2) 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。解決辦法： 1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后最好在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 2) 合理安排，或多用幾臺洗板機。 5 顯色可能原因： 1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑； 2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時保持顯色劑不外流； 3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。 6 終止可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。 7 讀板如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸；盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化，有效提高檢測質(zhì)量。在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進行操作，同時做好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才能保證檢測質(zhì)量。溫馨提示：不可用于臨床治療。

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楊燕燕

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