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篤瑪雞亮氨酰氨基肽酶(LAP) ELISA 試劑盒說明書

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品　　牌：
DM

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出廠價：
1 元/瓶

主要規(guī)格：
96T/48T

用　　途：
科研

雞亮氨酰氨基肽酶(LAP) ELISA 試劑盒 Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因及其相應(yīng)的解決辦法 1 選擇試劑選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡至少30分鐘。 2 加樣可能原因： 1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣； 2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。解決辦法： 1）標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2) 加樣后及時放入孵箱。 3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。 4) 如果采用AT或其他全自動加樣，最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標(biāo)本較多時，請分批操作。 3 孵育可能原因： 1) 孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底； 2) 孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗徹底。解決辦法： 1) 貼封片或加蓋； 2) 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。 4 洗板可能原因： 1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2) 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 3) 反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。解決辦法： 1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后最好在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 2) 合理安排，或多用幾臺洗板機。 5 顯色可能原因： 1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑； 2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時保持顯色劑不外流； 3) A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。 6 終止可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。 7 讀板如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸；盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化，有效提高檢測質(zhì)量。在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進行操作，同時做好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才能保證檢測質(zhì)量。雞亮氨酰氨基肽酶(LAP) ELISA 試劑盒 ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我公司將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期提高試驗質(zhì)量。雞亮氨酰氨基肽酶(LAP) ELISA 試劑盒 ELISA 實驗步驟： 1.包被抗原：稀釋液pH 9.6 碳酸鹽緩沖液，多肽濃度2ug/ml，0.1ml/孔，4oC過夜，洗凈。 2.1%BSA (pH 9.6 碳酸鹽緩沖液) 封閉，0.1ml/孔，37oC1h，洗凈。 3.稀釋抗血清(可稀釋不同濃度) 0.1ml/孔，37oC 30分鐘，洗凈。 4.稀釋辣根過氧化物每標(biāo)記的二抗0.1ml/孔，37oC 40分鐘，洗凈。 5.顯色：TMB顯色 A液：四甲基聯(lián)苯胺10mg 溶于DMF1ml中，再用pH5.0檸檬酸緩沖液稀釋100倍. B液：5ul加蒸餾水12.5ml 。終止液：2N硫酸 A液、B液各一滴，比光顯色10分鐘，終止液一滴。 6.450nm 波長測OD值

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楊燕燕

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