檢測認證人脈交流通訊錄
- 凍干羊抗人C9血清
操作步驟
試管法(改良 Mayer 法)
1、致敏羊紅細胞: 2%綿羊紅細胞加等量稀釋后的溶血素( 1:2000),混勻,置 37℃水浴 30min。
2、稀釋血清:待測血清 0.2ml,加應用液 3.8ml,稀釋度為 1:20。
3、配制溶血標準管:全溶血管:2%綿羊紅細胞 2ml 加 8ml 蒸餾水,混勻。
50%溶血管:取全溶血管液 2ml 加緩沖液 2ml。
4、按表所示,依次加各成分于試管中,混勻,置 37℃水浴 30min, 第 10 管為非溶血對照:補體 CH50 測定試管法
5、結果測定:取出試管, 2000r/min 離心 10min,對照管應不溶血。肉眼比色,選與 50%溶血標準管相近二管,再用分光光度計測(波長 542nm、 0.5cm 比色杯) OD 值,
確定與標準管最接近者為終點管,然后按下公式計算 CH50 值:
血清補體 CH50( U/ml) =( 1/血清用量)×稀釋度。
如第 5 管為終點管,測待測血清中CH50為66.7U/ml。血清補體CH50正常值為50-100U/ml。
凍干羊抗人C9血清
應用范圍:
酶標試劑、免疫比濁試劑、免疫膠乳試劑生產、提取純化抗體、組化實驗中
對應抗原,或封閉對應雜抗體,測定對應抗原濃度,或抗原夾芯法測定對應
抗體,吸收雜抗原成分,層析純化抗原,分析與鑒定對應抗原成分,封閉交
叉抗原,測定對應抗原成分,測定抗原純度等。
1.液體抗血清保存原則:避免反復凍融
2.短期保存的抗血清:如幾周內就會使用,收到后推薦在 2-8℃保存,2-8℃短暫保存
數周對活性沒有影響。
3.長期保存的抗體:如抗體需超過 1 個月后才會使用,請酌情分裝后于-20℃保存。
凍干羊抗人C9血清
常用標簽包括有Flag、myc、HA、His、GST、GFP、MBP等。
Flag標簽系統利用一個短的親水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目標蛋白;其純化條件是非變性的,因此可以純化所有有活性的融合蛋白。
His標簽是由6個組氨酸(His-His-His-His-His-His)組成的短肽,專門設計用于重組蛋白的吸附純化。由于分子量小,且較容易分離和純化,是目前使用最廣泛的一種。
GST標簽體系具有蛋白表達率高,表達產物純化方便,利于GST抗體制備的特點。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可從細菌裂解液中提取,在不變性的條件下通過親和層析得到。
GFP或其突變體EGFP等廣泛用于基因表達效率的檢測,以及和目的蛋白融合表達用于檢測目的蛋白的表達和分別。GFP抗體不經可以檢測GFP或其適當的突變體,也可以檢測和GFP或其適當的突變體融合表達蛋白的表達、細胞內定位,以及純化、定性或定量檢測GFP融合表達蛋白等。
Myc標簽(序列為:EQKLISEEDL)已成功應用于WB雜交技術、免疫沉淀IP和流式細胞術中。因此可用于檢測重組蛋白在細菌、酵母、昆蟲細胞和哺乳細胞中的表達情況。Myc重組蛋白質可通過偶聯Myc標簽抗體到活化的瓊脂糖上而進行親和純化。但Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會降低蛋白質的活力,因此Myc標簽系統廣泛應用于檢測但很少用于純化。
HA標簽系統利用一個HA(influenza hemagglutintin epitope:YPYDVPDYA)短肽融合到目標蛋白。HA標簽可位于蛋白質的C端或N端,該系統已廣泛應用于多種細胞類型,相應的HA標簽抗體也被廣泛運用。
MBP標簽蛋白大小為40kDa,由大腸桿菌K12的malE基因編碼。MBP可增加在細菌中過量表達的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。如果蛋白在細菌中表達,MBP可以融合在蛋白的N端或C端。可用MBP抗體或表達的目的蛋白特異性抗體檢測MBP標簽標記的重組蛋白。
其余標簽抗體還有V5、GFP、RFP、β-Actin、β-Tubulin、GAPDH、ERK1、AU1、Avi、B、CBP、DDDDK、E、E2、Glu-Glu、HAT、HPC4、HSV、KT3、KLH、MAT、Protein A、S、S1、SNAP、SRT、NWSHPQFEK、SUMO、T7、Tag-100、TAP、Trx、Ty1、TF、Universal、VSV-G等,但應用相對較少。
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