檢測(cè)認(rèn)證人脈交流通訊錄
- 1.簡(jiǎn)介 Charm? MRLBLTET快速檢測(cè)條，利用免疫原理，運(yùn)用ROSAò側(cè)流技術(shù)（快速一步檢測(cè)），快速檢測(cè)牛奶中的β-內(nèi)酰胺和四環(huán)素殘留，包括氨芐西林、阿莫西林、頭孢乙腈、頭孢氨芐、頭孢洛寧、頭孢唑啉、頭孢哌酮、頭孢喹諾、頭孢噻夫及其代謝物、頭孢呋肟、頭孢匹林、氯唑西林、雙氯西林和青霉素G以及四環(huán)素族中的金霉素、土霉素和四環(huán)素。檢測(cè)限為2ppb，符合歐盟MRL標(biāo)準(zhǔn)，可應(yīng)用于奶站、養(yǎng)殖戶、實(shí)驗(yàn)室、田間和檢控人員。 l 反應(yīng)原理 CHARM ROSA抗生素殘留快速檢測(cè)儀包括抗生素檢測(cè)條、孵育器和讀數(shù)儀，主要根據(jù)競(jìng)爭(zhēng)性受體-配體免疫反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)（受體是細(xì)胞在進(jìn)化過(guò)程中形成的細(xì)胞蛋白組分，能識(shí)別周圍環(huán)境中某種微量化學(xué)物質(zhì)；配體是能與受體特異性結(jié)合的物質(zhì)）。檢測(cè)條具有兩條俘獲帶，其中一條為檢測(cè)帶（T，由配體組成），另一條為控制帶（C）。當(dāng)樣品與被標(biāo)記的受體混合后，受體將在俘獲帶上被俘獲，并顯出紅色，隨后可以通過(guò)反應(yīng)后俘獲帶顏色的深淺來(lái)判定結(jié)果。 2.產(chǎn)品性能 靈敏度 詳見表1： 抗生素殘留 靈敏度（ppb） 歐盟MRL標(biāo)準(zhǔn)（ppb） Beta-lactam Drug Beta內(nèi)酰胺類 Amoxicillin 阿莫西林 2.5 4 Ampicillin 氨芐西林 2.5 4 Cefacetrile 頭孢乙腈 6 125 Cefalexin 頭孢氨芐 15 100 Cefalonium 頭孢洛寧 3 20 Cefazolin 頭孢唑啉 8 50 Cefoperazone 頭孢哌酮 4 50 Cefquinome 頭孢喹諾 15 20 Ceftiofur and Metabolite 頭孢噻呋及其代謝物 10 100 Cefuroxime 頭孢呋肟 2 50 Cephapirin 頭孢匹林 4 60 Cloxacillin 氯唑西林 25 30 Dicloxacillin 雙氯西林 20 30 Penicillin G 青霉素G 2 4 Tetracycline Drug 四環(huán)素類 Chlortetracycline 金霉素 50 100 Oxytetracycline 土霉素 50 100 Tetracycline 四環(huán)素 10 100 交叉反應(yīng) 以下獸藥殘留在100ppb時(shí)不會(huì)干擾檢測(cè)：氨基糖苷類、酰胺醇類、氟喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯類/林可胺類、硝基呋喃類、四環(huán)素、磺胺類或氯噻嗪、地塞米松、安乃近、呋喃苯胺酸、伊佛霉素、新生霉素、催產(chǎn)素、對(duì)氨基苯甲酸、苯基丁氮酮、三氯噻嗪和噻苯咪唑。其他β-內(nèi)酰胺和四環(huán)素可以被檢測(cè)到：萘夫西林50-70ppb，苯唑西林40-60ppb，哌拉西林3-5ppb。體細(xì)胞濃度為106SCC/ml或細(xì)菌濃度為3′105CFU/g時(shí)不會(huì)干擾檢測(cè)。 3．試劑盒組份及另需的材料 試劑盒組份 另需的材料 耗材 設(shè)備 MRLBLTET檢測(cè)條：100條 MRLBLTET / TET陽(yáng)性質(zhì)控：5片 用戶手冊(cè) 槍頭 ROSA 孵育器（56℃） ROSA 讀數(shù)儀 打印機(jī)（可選） 300 μL 移液器（可選） 4. 試劑制備和儲(chǔ)存 將試劑盒保存在0-7℃條件下，不要冷凍！ l 檢測(cè)條 保存在密封的箔罐中，每次檢測(cè)前取出所需數(shù)量的檢測(cè)條后，將箔罐密封好重新放回冰箱。 避免保存在高濕度條件下。箔罐中有一包防潮劑，正常情況下，防潮劑中顆粒呈藍(lán)色，若顆粒變?yōu)樽仙蚣t色時(shí)則說(shuō)明濕度太高，檢測(cè)條已經(jīng)變質(zhì)。 檢測(cè)條在室溫條件下可保存12小時(shí)。 l 陰性質(zhì)控 使用β-內(nèi)酰胺和四環(huán)素陰性牛奶作為陰性質(zhì)控，它不僅可用于性能監(jiān)控，還可用于溶解陽(yáng)性質(zhì)控片。 冷藏下，陰性質(zhì)控可儲(chǔ)存72小時(shí)。 l 陽(yáng)性質(zhì)控 未水化時(shí)和試劑條一樣干燥低溫保存。 用5ml陰性奶溶解陽(yáng)性質(zhì)控片，配制成4±0.4ppb青霉素G 和100±20ppb土霉素陽(yáng)性質(zhì)控液，冰浴放置備用，用前振蕩混勻。 陽(yáng)性質(zhì)控可在冷藏條件下保存48小時(shí)。 l 樣品和質(zhì)控液的長(zhǎng)期儲(chǔ)存 樣品檢測(cè)需在奶擠出5天內(nèi)進(jìn)行。樣品可分成小份（至少為0.5ml）放在小瓶中冷凍，冷凍的樣品在￡－15℃溫度下可保存2個(gè)月。 如需長(zhǎng)時(shí)間保存復(fù)原的質(zhì)控物，在復(fù)原6小時(shí)內(nèi)分裝（1mL）冷凍保存，－15℃或更低溫可保存1個(gè)月。 解凍的樣品（或陽(yáng)性質(zhì)控）置于冰水中振蕩融化。解凍后的樣品冷藏下可儲(chǔ)存24小時(shí)。注意如果出現(xiàn)蛋白沉淀，則棄用。解凍后的樣品檢測(cè)前需1200g ± 200離心3分鐘。冷卻，使用脫脂牛奶進(jìn)行檢測(cè)。 解凍的樣品未用完的請(qǐng)丟棄，不要再冷凍。 解凍后的陽(yáng)性質(zhì)控使用前不需要離心。 脫。 5.注意事項(xiàng) 1) 高脂肪樣品（＞6.5%）會(huì)導(dǎo)致無(wú)效結(jié)果。不要將無(wú)效的檢測(cè)條插入讀數(shù)儀。 2) 檢測(cè)條上的碎片影響讀數(shù)儀光學(xué)性能，因此在將檢測(cè)條插入讀數(shù)儀前，應(yīng)擦去檢測(cè)條上的灰塵和牛奶殘?jiān)?保持設(shè)備清潔。 3) ROSA孵育器應(yīng)保持清潔和水平，溫度應(yīng)設(shè)定在56 ± 1℃。暫時(shí)不用時(shí)放低孵育器蓋子，但不要鎖定。 4) 因室溫不同，ROSA孵育器達(dá)到適合的溫度需要10分鐘左右。 5) 如果樣品為冷凍奶、復(fù)原奶或含沉淀物的牛奶，檢測(cè)前應(yīng)1200±200g離心2min，使用脫脂奶進(jìn)行檢測(cè)。低脂奶可增加檢測(cè)靈敏度。 6) 請(qǐng)勿使用全脂巴氏殺菌奶進(jìn)行檢測(cè)。 6.實(shí)驗(yàn)流程 l 儀器準(zhǔn)備 1) 開啟孵育器電源，稍等至溫度到達(dá)56±1℃。 2) 開啟讀數(shù)儀，1.08.2或更低版本的讀數(shù)儀調(diào)整至MRL頻道；1.09.00或更高版本調(diào)到TETR頻道的3-line模式。 l 檢測(cè)步驟 1) 取出牛奶待檢樣品，搖勻。 2) 將檢測(cè)條放置在孵育器的槽中，在檢測(cè)條上標(biāo)記樣品編號(hào)。 3) 小心將粘箔撕開，至指示線處。 4) 用移液器取300μl 牛奶樣品，豎直緩慢滴加至檢測(cè)條兩側(cè)任意一側(cè)的凹槽中。將粘箔粘回。 5) 蓋上孵育器塑料蓋，自動(dòng)開始倒計(jì)時(shí)。 6) 8分鐘孵育結(jié)束后，蜂鳴器響動(dòng)。打開塑料蓋，取出檢測(cè)條，不要擠壓塑料泡處。 7) 目視或通過(guò)讀數(shù)儀判讀結(jié)果。 7.結(jié)果分析 l 目測(cè)篩選 目測(cè)對(duì)比質(zhì)控線（BL/TE）和檢測(cè)線（T）的色差。若兩條檢測(cè)線中有一條或者兩條顏色均淺于質(zhì)控線，或檢測(cè)線未出現(xiàn)，則說(shuō)明結(jié)果為陽(yáng)性；若檢測(cè)線顏色與質(zhì)控線相當(dāng)或深于質(zhì)控線，則說(shuō)明結(jié)果為陰性；若質(zhì)控線未出現(xiàn)，質(zhì)控線模糊或不均勻，BL線、TE線或質(zhì)控線模糊，則說(shuō)明結(jié)果不可用，需要重新進(jìn)行檢測(cè)。 l 讀數(shù)儀結(jié)果讀取及分析 將檢測(cè)條凸槽向下水平插入讀數(shù)儀中，讀取MRL頻道的結(jié)果。若需要，進(jìn)入SAMPLE 或OPERATOR并點(diǎn)擊“ENTER”鍵，8秒內(nèi)將會(huì)出現(xiàn)結(jié)果。 如果屏幕上READING結(jié)果出現(xiàn)陰性的英文“RESULT NEGATIVE”字樣，樣品為陰性。點(diǎn)擊“Enter”鍵，讀取陰性或陽(yáng)性結(jié)果。 若出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，建議重新進(jìn)行檢測(cè)以確定結(jié)果。 l 陽(yáng)性樣品重新檢測(cè) 1) 初步檢測(cè)為陽(yáng)性的樣品（復(fù)樣）需用同一個(gè)陰性質(zhì)控和陽(yáng)性質(zhì)控重新檢測(cè)。 2) 陰性質(zhì)控的結(jié)果應(yīng)為Result：Negative，READING少于-400。 3) 陽(yáng)性質(zhì)控的結(jié)果應(yīng)為Result：Positive，READING大于+400。 4) 如果任一質(zhì)控的結(jié)果不在范圍之內(nèi)，需重新進(jìn)行上述檢測(cè)。如果結(jié)果仍不在范圍之內(nèi)，請(qǐng)放棄，與我們聯(lián)系。 5) 如果兩個(gè)質(zhì)控的結(jié)果都在范圍之內(nèi)，并且重新檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果中任一或全部為Result：Positive，那么樣品可判定為β-內(nèi)酰胺或四環(huán)素陽(yáng)性。
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