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對應法規：化妝品衛生規范2007
CNAS認可項目：是

1 范圍本規范規定了測定祛痘除螨類化妝品中鹽酸美滿霉素、二水土霉素、鹽酸四環素、鹽酸金霉素、鹽酸多西環素、氯霉素6 種抗生素和甲硝唑的高效液相色譜法。本規范適用于祛痘除螨類化妝品中鹽酸美滿霉素、二水土霉素、鹽酸四環素、鹽酸金霉素、鹽酸多西環素、氯霉素和甲硝唑含量的測定。 2 方法提要鹽酸美滿霉素、二水土霉素、鹽酸四環素、鹽酸金霉素、鹽酸多西環素、氯霉素和甲硝唑在268nm 處有紫外吸收，可用反相高效液相色譜分離，并根據保留時間和紫外光譜圖定性，峰面積定量。各組分的檢出限及取1g 樣品時的檢出濃度見表1。表1 各組分的檢出限和檢出濃度物質名稱鹽酸美滿霉素甲硝唑二水土霉素鹽酸四環素鹽酸金霉素鹽酸多西環素氯霉素檢出限（ng） 50 50 1 1 1 1 1 定量下限（ng） 150 150 3.3 3.3 3.3 3.3 3.3 檢出濃度（μg/g） 50 50 1 1 1 1 1 最低定量濃度（μg/g） 150 150 3.3 3.3 3.3 3.3 3.3 3 試劑 3.1 甲醇，色譜純。 3.2 乙腈，色譜純。 3.3 草酸，分析純。 3.4 鹽酸（0.1mol/L）：取優級純濃鹽酸（ρ20=1.19g/mL）8.3mL 加水至1L。 3.5 混合標準儲備溶液：分別準確稱取鹽酸美滿霉素、二水土霉素、鹽酸四環素、鹽酸金霉素、鹽酸多西環素、氯霉素、甲硝唑各0.1000g，用少許甲醇（3.1）及鹽酸（3.4）溶解，移入100mL 容量瓶中，甲醇定容至刻度，搖勻，配成各組分質量濃度為1.00g/L 的混合標準溶液。 4 儀器 4.1 高效液相色譜儀，具二極管陣列檢測器，色譜處理機或色譜工作站。 4.2 微量進樣器或自動進樣裝置。 4.3 超聲波清洗器。 5 分析步驟 5.1 樣品預處理準確稱取樣品約1g 于10mL 具塞比色管中，加入甲醇（3.1）+鹽酸（3.2）=1+1 的混合溶液至刻度，振搖，超聲提取20min～30min。經0.45μm 濾膜過濾，濾液作為待測溶液備用。 253 5.2 色譜參考條件色譜柱：C18 柱，250mm×4.6mm I.D.，5μm；檢測器：二極管陣列檢測器，檢測波長268nm；流動相：0.01mol/L 草酸溶液（磷酸調節水溶液的pH至2.0）+甲醇+乙腈=67+11+22（HPLC 分析前，經0.45μm 濾膜過濾及真空脫氣）；流量：0.8mL/min；柱溫：室溫。 5.3 校準曲線的制備準確移取不同體積的混合標準溶液（3.5）于10mL 具塞比色管中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。經0.45μm 濾膜過濾備用。在設定色譜條件下，分別取10μL 進行分析。根據標準系列質量濃度和峰面積繪制校準曲線。 5.4 樣品測定在設定的色譜條件下進10μL 樣品溶液（5.1）進行分析，若樣品含量過高，應用流動相稀釋后測定。根據峰面積，從校準曲線上查得相應成分的質量濃度。 6 計算 ρ×V ω（抗生素、甲硝唑）＝ m 式中：ω（抗生素、甲硝唑）——化妝品中抗生素、甲硝唑的質量分數，μg/g； ρ——測試溶液中抗生素、甲硝唑的質量濃度，mg/L； V——樣品定容體積，mL； m——樣品取樣量，g。 7 色譜圖圖1 抗生素、甲硝唑的色譜圖 1：鹽酸美滿霉素；2：甲硝唑；3：二水土霉素；4：鹽酸四環素； 5：鹽酸金霉素；6：鹽酸多西環素；7：氯霉素 254

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