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性激素測(cè)試
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對(duì)應(yīng)法規(guī):化妝品衛(wèi)生規(guī)范2007
CNAS認(rèn)可項(xiàng)目:是
- 1 范圍
本規(guī)范規(guī)定了測(cè)定化妝品中雌三醇等7 種性激素的高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器
法、高效液相色譜-紫外檢測(cè)器/熒光檢測(cè)器法和氣相色譜/質(zhì)譜鑒定法。
本規(guī)范適用于化妝品中雌三醇等7 種性激素的檢測(cè)和鑒定。
第一法 高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器法
2 方法提要
以有機(jī)溶劑提取化妝品中的性激素,用高效液相色譜儀進(jìn)行分析,以保留時(shí)間和紫外
吸收光譜圖或熒光光譜圖定性,以峰面積進(jìn)行定量。各激素的檢出限及取1g 樣品時(shí)的檢出
濃度見表1。
表1 各激素的檢出限和檢出濃度
激素組分 雌三醇 雌酮 己烯雌酚雌二醇睪丸酮甲基睪丸酮 黃體酮
檢出限,μg 0.02 0.04 0.01 0.02 0.002 0.002 0.003
檢出濃度,μg/g 40 80 20 40 4 4 6
3 試劑
本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑除另有說明外,均為優(yōu)級(jí)純?cè)噭?
3.1 甲醇。
3.2 飽和氯化鈉溶液。
3.3 環(huán)己烷。
3.4 硫酸 [?(H2SO4)=2%]:取硫酸(ρ20=1.84g/mL)2mL,緩慢加入到98mL 水中,
混勻。
3.5 激素標(biāo)準(zhǔn)溶液
3.5.1 雌激素標(biāo)準(zhǔn)溶液[ρ(雌酮、雌二醇、雌三醇、己烯雌酚)=2g/L]:分別稱取雌酮、
雌二醇、雌三醇、己烯雌酚各0.200g,用少量甲醇(3.1)溶解,移至100mL 容量瓶中,用
甲醇稀釋到刻度。
3.5.2 雄激素標(biāo)準(zhǔn)溶液[ρ(睪丸酮、甲基睪丸酮)=600mg/L]:分別稱取睪丸酮、甲基睪丸
酮各0.600g,用少量甲醇(3.1)溶解,轉(zhuǎn)移至100mL 容量瓶中,用甲醇稀釋到刻度。1mL
此溶液含以上兩種雄激素6.00mg。移取此標(biāo)準(zhǔn)溶液10.0mL 置于100mL 容量瓶中,用甲醇
(3.1)稀釋到刻度。
3.5.3 孕激素標(biāo)準(zhǔn)溶液[ρ(黃體酮)=600mg/L]:稱取黃體酮0.600g,用少量甲醇(3.1)
溶解,轉(zhuǎn)移至100mL 容量瓶中,用甲醇稀釋到刻度。1mL 此溶液含孕激素6.00mg。移取此
標(biāo)準(zhǔn)溶液10.0mL 置于100mL 容量瓶中,用甲醇(3.1)稀釋到刻度。
221
3.5.4 混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液:分別移取雌激素標(biāo)準(zhǔn)溶液(3.5.1)50.0mL,雄激素標(biāo)準(zhǔn)溶液(3.5.2)
5.00mL 和孕激素標(biāo)準(zhǔn)溶液(3.5.3)5.00mL 置于100mL 容量瓶中,用甲醇(3.1)稀釋到刻
度。1mL 此溶液分別含4 種雌激素各1.00mg、2 種雄激素各30.0μg 和1 種孕激素30.0μg。
4 儀器
4.1 高效液相色譜儀,具等容泵、二極管陣列檢測(cè)器或熒光檢測(cè)器。
4.2 離心機(jī)。
4.3 具塞比色管,10mL。
5 分析步驟
5.1 樣品預(yù)處理
5.1.1 溶液狀樣品:準(zhǔn)確稱取樣品1g~2g 于10mL 具塞比色管中,在水浴上餾除乙醇等揮
發(fā)性有機(jī)溶劑,用甲醇(3.1)稀釋到10mL,備用。
5.1.2 膏狀、乳狀樣品:準(zhǔn)確稱取樣品1g~2g 于100mL 錐形瓶中,加入飽和氯化鈉溶液(3.2)
50mL,硫酸(3.4)2mL,振蕩溶解后轉(zhuǎn)移至100mL 分液漏斗。以環(huán)己烷(3.3)30mL 分三
次萃取,必要時(shí)離心分離。合并環(huán)己烷并在水浴上餾除。用甲醇(3.1)溶解殘留物,轉(zhuǎn)移
到10mL 具塞比色管中,用甲醇稀釋到刻度。混勻后,經(jīng)0.45μm 濾膜過濾,濾液備用。
5.2 色譜參考條件
色譜柱:C18 柱,250×4.6mm,10μm;
檢測(cè)波長(zhǎng):二極管陣列檢測(cè)器(雌性激素-204nm,雄性激素-245nm)或熒光檢測(cè)器
(激發(fā)波長(zhǎng)280nm,發(fā)射波長(zhǎng)310nm);
流動(dòng)相:甲醇+水=60+40;
流速:1.3mL/min;
5.3 校準(zhǔn)曲線的制備
移取激素標(biāo)準(zhǔn)使用溶液(3.5.4)0.00、1.00、2.00、5.00mL 置于10mL 具塞比色管中,
用甲醇(3.1)稀釋到刻度。調(diào)節(jié)儀器到最佳狀態(tài),取樣5μL 注入高效液相色譜儀,以標(biāo)準(zhǔn)
品的峰面積繪制校準(zhǔn)曲線。
5.4 測(cè)定
取待測(cè)溶液5μL 注入高效液相色譜儀,根據(jù)峰的保留時(shí)間和紫外吸收光譜圖或熒光光
譜圖定性,根據(jù)峰面積從曲線上查出待測(cè)溶液中激素的質(zhì)量濃度。
6 計(jì)算
ρ×V
ω(激素)=
m
式中:ω(激素)——樣品中激素的質(zhì)量分?jǐn)?shù),μg/g;
ρ——從曲線上查出測(cè)試溶液中激素的質(zhì)量濃度,mg/L;
V——樣品定容體積,mL;
m——樣品取樣量,g。
222
7 色譜圖
第二法 高效液相色譜-紫外檢測(cè)器法/熒光檢測(cè)器法
8 方
SGS福建
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